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. 技术服务 常见问题

细胞嵌入皿常见问题

2021-11-12

如何选择嵌入皿小室产品的孔径?

首先需要明确您所进行的应用是否需要细胞穿过小室膜上的孔。一般来说,共培养实验、Caco-2 Transport实验及构建细胞极化模型等不需要细胞穿膜,大多选择0.4μm或1.0μm等小孔径的产品。而在细胞迁移实验及侵袭实验中,细胞则需要穿过上室的膜、到达膜的背侧(少数情况下会落至下室中,如悬浮细胞的迁移/侵袭实验),因此需要选择较大孔径,(如肿瘤细胞的迁移、侵袭实验常选择8μm孔径的产品)。

如何挑选小室膜的材质?

洁特小室有聚碳酸酯(Polycarbonate, PC),聚酯(Polyesteror PolyethyleneTerephthalate,PET)两种膜材质。

PC和PET膜材质应用都很广泛,二者的主要区别在光透性方面,即PC膜半透明,不太方便在培养的过程中观察上室细胞的形态;PET膜透明,方便在相差显微镜下观察细胞的状态。

另外,在0.4μm孔径下,PC膜和PET膜的孔密度(单位面积上的孔数量)不同,PC膜提供更高的膜孔密度。您可根据对实验的要求(是否需要观察细胞状态,是否需要更高孔密度的膜)来选择。


小室的膜材质与细胞培养皿/瓶不同,细胞贴壁情况会有什么差异吗?

未包被的小室膜材质(PC或PET)虽与普通塑料细胞培养皿/瓶的材质(Polystyrene, PS)不同,但膜的两侧均经过组织培养表面处理(TissueCulture Treated, TC Treated),与一般做细胞培养的PS耗材的表面处理相同。因此,在正常情况下,细胞在小室内的贴壁情况应与培养皿/瓶中类似。在普通培养时需包被基质蛋白等辅助贴壁的细胞,在小室上仍然需要包被。包被方法类似普通培养表面,可通过小室膜表面积换算所需包被液的量

小室产品可否灭菌后重复使用?

小室产品为一次性使用的耗材,不可重复使用。小室的孔板和膜的材质均无法承受高压蒸汽灭菌,且无法确认重复使用的小室是否被彻底清洁,因此无法保障重复使用的实验效果。

嵌入皿小室是否需要匹配特殊的接收板/下室产品?

与相应规格的普通细胞培养多孔板(如TCP010006、TCP010012、TCP010024等)适配。

在接种细胞前,是否需要进行“水化”?

大多数应用并不需要额外进行“水化”操作,该操作主要用于Matrigel预包被的侵袭小室,在使用前需平衡至室温,并加入预温至37摄氏度的无血清培养基,于培养箱中水化两小时。

少数情况下,提前在上下室加入培养基,并在培养箱中预孵育大于1小时可帮助细胞贴壁,但大多数细胞可以直接接种。

接种细胞的加液顺序如何?

一般先将预热的培养基加入多孔板的孔中(下室),再轻轻将小室放入孔中。在放入时,建议将小室稍稍倾斜,一侧先接触液面,以免垂直放入在小室下生成气泡。之后便可将混合均匀的细胞悬液加入小室内部。

小室膜上既然有许多小孔,在包被基质蛋白或一些单独加液在上室的情况下,液体是否会很快漏至下室?

一般不会。小室的膜上的小孔孔径有限,在表面张力的作用下,加入上室的包被液并不会很快漏下,如果短时间内发现有液体大量滴下,需检查小室的膜是否有裂痕或不完整的情况。

共培养实验中,上下室接种细胞的位置一般如何安排?

由于小室膜上小孔的存在,上下室的培养基可以交流互通,接种在上下室的细胞是相互影响的。接种细胞的位置安排需考虑收集细胞、进行下游检测的方便程度,同时也需要考虑到上下室培养面积的差异(上室的有效生长面积比下室小,相应地,接种的细胞量恐怕有差异),您可参考相关文献或进行预实验来最终决定实验安排。

小室内接种的细胞可否消化收集?

可以的。您可采用在普通培养器皿中消化相应细胞的试剂(如胰酶等),在上下室均加入推荐体积的消化液。

对小室内接种的细胞进行药物处理时,药物是仅需加入上室吗?

由于小室膜上小孔的存在,我们建议您在上下室内均加入含有同样浓度药物的培养基,以确保您的药物处理浓度。

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